當歸養血口服液的水提工藝的探討
［摘 要］ 目的：優選當歸養血口服液的水提工藝。方法：以處方中所含有效成分芍苷含量為評價指標，采用L9(34)正交試驗，對影響煮提效果的諸因素(加水量、煎煮時間、煎煮次數)進行了優選，最后確定提取工藝。結果：優選當歸養血口服液以加水10倍，煎煮3次，每次時間為60 min提取效果最好。結論：該提取工藝可行，試驗結果為確定當歸養血口服液的提取工藝提供了實驗依據。
［關鍵詞］ 當歸養血口服液；提取工藝；正交試驗
當歸養血口服液是由當歸、川芎、黨參、甘草、白芍、黃芪、阿膠等組成的口服液制劑，具有調補氣血等功能，主治氣血兩虛之病證。上用于久病、病后失調、失血過多及一切慢性消耗性病證，癥狀見面色萎黃或蒼白、渾身無力、頭暈心悸、氣短懶言、舌淡白、脈象細弱或虛大無力等。該制劑系在古方“八珍丸”加味基礎上經劑型改革制成的院內制劑，經多年的臨床應用，療效確切。為了提高該制劑的質量，筆者對當歸養血口服液的提取工藝進行了研究。由于當歸、川芎、白術等藥材均含有揮發油，分別約為0.42％、1％和1.4％［1］，因此，我們先將該部分藥材進行水蒸氣蒸餾提取揮發油，以免后期工藝中損失，然后將藥渣及其他藥材(阿膠除外)以水為溶媒進行煎煮，再用乙醇沉淀除取雜質，阿膠以打碎并烊化形式加入濾液中。本文采用正交試驗，以處方中所含有效成分芍藥苷含量為評價指標，篩選出合理的水提工藝。現將實驗結果報告如下。
1 儀器與試藥
島津LC?6A高效液相色譜儀；SPD?6AV型紫外檢測器；超聲波清洗儀：華南超聲儀器廠；天平：Precisa 57871(全華科學儀器有限公司)；芍藥苷對照品(中國藥品生物制品檢定所)；實驗藥材(市售，經鑒定符合藥典規定)；甲醇為色譜純；其他試劑均為分析純。
2 實驗方法與結果
2.1 水提工藝的正交試驗篩選 選擇影響提取效果的主要因素：加水量(A)、提取時間(B)、煎煮次數(C)作為考察對象，以芍藥苷含量為評價指標，每個因素確定不同的水平進行試驗。因素水平見表1，L9(34)正交試驗設計見表2。
表1 因素水平表（略）
2.2 供試品溶液的制備 取處方量的藥材(阿膠除外)共9份，按表2所列不同條件進行提取，其中的當歸、川芎、白術等藥材先提取揮發油2 h后，再將藥渣與其他藥材共同提取。將每組的水提液按工藝制成相應的口服液。精密稱取本品2 ml，胃水浴上蒸近干，殘渣用適量的稀乙醇溶液并分次轉移至50 ml量瓶中，加稀乙醇至刻度，超聲處理30 min，濾過，棄去初濾液，取續濾液10 ml，加在中性氧化鋁柱(4 g，200目～300目)上，用稀乙醇25 ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，用稀乙醇分次溶解殘渣，轉移至10 ml容量瓶中并稀釋至刻度，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，制得供試品溶液。
2.3 對照品溶液制備 精密稱取在五氧化二磷減壓干燥器中干燥36 h的芍藥苷對照品12.5 mg，置25 ml容量瓶中，加稀乙醇適量，振搖使溶解，并用稀乙醇稀釋至刻度，搖勻，超聲除去氣泡，用稀乙醇補足至刻度，搖勻后作為對照品溶液。
2.4 色譜條件［2］ 色譜柱：HypersilC 18柱(4.6 mm*250 mm，5 μm)；流動相：甲醇?水(28∶72)；流速：0.8 ml／min；紫外檢測波長：λ=230 nm；進樣量：20 μl；柱溫：25 ℃；理論板數按芍藥苷峰計算應≤10 000。
2.5 標準曲線的制備 精密吸取對照品溶液0.5 ml、1.0 ml、2.0 ml、3.0 ml、4.0 ml、5.0 ml分別置于10 ml容量瓶中，用稀乙醇稀釋至刻度，搖勻；分別精密吸取10 μl，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定峰面積，并以芍藥苷的進樣量(μg／μl)為橫坐標，相應的峰面積(A*105)為縱坐標繪制標準曲線，其回歸方程為：Y=2.648×106X+5.553×103，相關系數r=0.999 1。結果表明：芍藥苷進樣量在0.25 μg～2.5 μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系。
2.6 回收率試驗 精密吸取已知含量的當歸養血口服液1.0 ml，準確加入一定量的芍藥苷，按2.2項“供試品溶液的制備”方法制成供試品溶液，再按“含量測定方法”依法操作，回收率為98.76％，RSD=1.53％。
2.7 樣品中芍藥苷含量測定 取對照品溶液(0.05 mg／ml)與供試品溶液，用0.45 μm微孔濾膜濾過后，按上述的色譜條件分別精密進樣20 μl，測定峰面積。根據標準曲線換算求得各樣品中芍藥苷含量，由此確定正交試驗的含量測定方法。正交試驗結果見表2，對表2進行分析，結果見表3。
表2 正交試驗安排與結果（略）
注：*為同一樣品3次測定值的平均值。
表3 芍藥苷含量方差分析結果（略）
2.8 結果分析 由表2可知，當歸養血口服液的水提工藝條件以A3B1C3為佳，即加10倍量水煎煮3次，60 min/次，同時提示，影響水提效果的主要因素是提取次數，其次是加水量，煎煮時間影響最小，為驗證直觀分析結果，我們對實驗數據進行了方差分析，結果提取次數對水提效果的影響具有十分顯著性意義，這與直觀分析結論也是相同的。
2.9 驗證實驗 按上述確定的最佳工藝條件進行驗證。取相同量的藥材3份，按最佳工藝條件進行重復性試驗，測得芍藥苷的含量分別為0．931 2 mg／ml、0．934 7 mg／ml、0．930 6 mg／ml，與正交表中的試驗結果比較，認為驗證結果較為滿意。因此，確認當歸養血口服液的水提最佳工藝條件為加10倍量水煎煮3次，60 min/次。
3 討論
筆者通過對當歸養血口服液的水提工藝進行研究，確定了最佳工藝，即先將當歸、川芎、白術等藥材進行水蒸氣蒸餾提取揮發油，然后將藥渣及其他藥材(阿膠除外)以水為溶媒進行煎煮，加10倍藥材量的水煎煮3次，60 min/次，在驗證試驗中所得芍藥苷的含量與正交試驗中所得芍藥苷的含量基本一致，表明優選出的水提工藝為最佳提取工藝。本品是在古方“八珍湯”的基礎上加味改劑型制成的中藥制劑，由補氣健脾之四君子湯與補血調血的四物湯，再加入黃芪和阿膠配合組成的氣血雙補方，方中用黨參、黃芪、熟地補氣血為主藥，輔以白術、茯苓益氣健脾燥濕；當歸、阿膠、白芍養血和營；川芎行氣活血，甘草和中益氣、調和諸藥。研究表明本品具有強心、興奮造血系統、調節子宮機能等作用。
參考文獻：
［1］ 鄭虎占，董澤宏，佘靖.中藥現代研究與應用［M］.北京：學苑出版社，1997：1807.
［2］ 葉立新，賴素萍，等.當歸養血口服液質量標準的研究［J］.中華藥雜志，2005，20(增刊)：293.
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