正交實驗法優選清熱利咽膠囊提取工藝研究
畢業【摘要】 目的 考察清熱利咽膠囊水煎煮工藝條件。方法 以加水量、煎煮時間和煎煮次數3個因素進行正交實驗,以沒食子酸含量和浸膏收率為評價指標綜合評分,確定清熱利咽膠囊的最佳提取工藝條件。結果 清熱利咽膠囊的最佳提取工藝為：加10倍量水，煎煮3次，每次1.0小時。結論 清熱利咽膠囊提取工藝合理、可行。
【關鍵詞】 清熱利咽膠囊 ； 正交實驗 ； 提取； 沒食子酸； HPLC
Study on Preparation Procedure for Qingre Liyan Capsule with Orthogonal Experiment
YU Ling?ying1 ,ZHANG Dan2 ,HU Hui?ling1,LIAN Xiao?xiao1
(1.Chengdu University of Traditional Chinese Medicine,Chengdu 610072,China；2.Department of Pharmacy, Luzhou Medical College,Sichuan Luzhou 646000,China） 畢業網網
【Abstract】 Objective To investigate the preparation conditions for Qingre Liyan capsule.Methods The orthogonal experiment was carried on with 3 factors,water quantity,the preparation time and the decoction frequeney,and composite grading were measured by the gallic acid content and extraction rate to determine best preparation conditions for Qingre Liyan capsule.Result The best preparation conditions of Qingre Liyan capsule is: 10 times of water quantity,3 times for decoction,1 hours for each time.Conclusion The preparation conditions of Qingre Liyan capsule is reasonable and feasible.
【Key words】 Qingre Liyan capsule； orthogonal experiment； preparation； gallic acid； HPLC
清熱利咽膠囊為臨床經驗方，由余甘子、桔梗、麥冬等藥物組成，具有清熱瀉火、生津利咽作用，主要用于口干咽燥，咽喉干癢疼痛等癥狀。根據處方中藥物性質，結合生產實際，采用水煎煮法進行提取。擬采用正交實驗方法，以沒食子酸含量和浸膏收率為評價指標進行綜合評分，優選清熱利咽膠囊提取工藝。現將研究結果報告如下。
1 實驗材料、試劑和儀器
材料與試劑 藥材購于成都市荷花池中藥材市場，經檢測符合《中國藥典》2005年版一部有關的規定。沒食子酸(批號110831?200302，供含量測定)，中國藥品生物制品檢定所提供。乙腈為色譜純，水為重蒸餾水，其余試劑均為分析純。
儀器島津LC?10A高效液相色譜儀； 賽多利斯BP211D電子天平。
2 實驗方法與結果
2.1 實驗設計
根據處方中藥物主要有效成分的性質，選擇采用水煎煮提取，并對提取有較大影響的加水量、煎煮時間、 煎煮次數三個因素進行考察，每個因素選擇3個水平，用 (L9（34） )正交表安排實驗。因素水平見表1.由于余甘子是君藥，沒食子酸是其中的主要有效成分之一，因此選擇沒食子酸為主要評價指標，浸膏收率作為輔助評價指標，采用綜合評分方法對提取條件進行評價。
2.2 實驗方法
稱取飲片9份，按正交設計方案，進行煎煮提取，濃縮定容至500 ml，備用。表1 實驗因素水平表
2.2.1 浸膏收率的測定［1］ 分別精密量取水煎液50 ml 于已干燥至恒重的蒸發皿中，水浴濃縮至干，置烘箱中105℃干燥3 h，取出，置干燥器中冷卻30 min，精密稱重，計算浸膏收率。
2.2.2 沒食子酸含量測定［2］ ①色譜條件：用18烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑； 乙腈?0.1%磷酸（7∶93）為流動相； 檢測波長為273 nm； 柱溫40℃； 流速1 ml/min； 理論塔板數按沒食子酸峰計算不低于2 500.②對照品溶液的制備：取沒食子酸對照品，精密稱定，加甲醇制成0.04 mg/ml的溶液作為對照品溶液。③供試溶液的制備：分別取正交實驗的藥液5 ml于25 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，振搖均勻，再精密吸取1 ml于10 ml量瓶中，甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液。④缺余甘子陰性樣品的制備：稱取缺余甘子的處方量藥材，同上述方法制成余甘子陰性供試溶液。⑤標準曲線制備：取對照品溶液，分別精密吸取1、2、4、6、8、10 ml至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，分別進樣10 μl，按上述色譜條件測定峰面積。以進樣量為橫坐標，峰面積為縱坐標，進行回歸，得線性方程Y=2 011 966.99X+9 713.16，r=0.999 9，結果表明，進樣量在0.040～0.400 μg之間呈良好的線性關系。⑥測定：分別精密吸取正交實驗樣品溶液及對照品溶液各10 μl，注入液相色譜儀，測定沒食子酸峰面積，計算含量。
2.3 實驗結果與分析 畢業網網
以食子酸的含量與浸膏收率為評價指標，沒食子酸的含量代表提取物中有效成分的含量，應作為工藝評價的主要指標，權重系數為0.8； 浸膏收率高低也在一定程度反映提取的效果，特別是大生產中具有意義，故權重系數為0.2.實驗結果與數據分析（見表2、3）。
方差分析結果表明，各因素對提取的影響順序為：C＞A＞B，表明因素C和A影響較大，即加水量和煎煮次數對提取效果有顯著影響，最佳工藝為A3B3C3.由于煎煮時間對提取無顯著影響，結合生產實際，提取工藝條件調整為A3B2C3：即加10倍量水，煎煮3次，每次1.0小時。表2 正交實驗及實驗結果表3 正交實驗方差分析
2.4 驗證實驗
根據篩選的工藝條件，做3份平行實驗進行驗證，結果浸膏收率為28.59 %、29.86 %、27.93 %； 沒食子酸的含量為：30.24 mg/g、31.02 mg/g、29.93 mg/g.實驗結果可以看出，所篩選的工藝合理、穩定，可行。
3 小結與討論
3.1 采用多指標綜合評分方法，確定清熱利咽膠囊的提取工藝為：加10倍量水，煎煮3次，每次1.0小時，提取工藝科學、穩定、可行，具有生產可行性。
3.2 在本復方制劑中對沒食子酸的含量測定，曾采用甲醇?水?磷酸的不同比例作為流動相進行考察，但基線不穩定，樣品分離度差。經過多次實驗，最后確定正文中所用的流動相，能很好地分離沒食子酸，測定結果準確、可行。
【參考文獻】
［1］ 國家藥典委員會．中華人民共和國藥典一部［S］.北京：化學工業出版社，2005：附錄×.
［2］ 孫桂梅，吳宏巖，王會平，等．高效液相色譜法測定克銀丸中沒食子酸含量［J］.中國藥業，2006，15（13）：42.
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