高效液相色譜法測定羅布麻茶中槲皮素的含量
Abstract：Objective To determine the content of quercetin in the Luobuma Tea by HPLC. Method The mobile phase consisted of methanol-0.4% phosphoric acid (50∶50). Kromasil C18 column (250 mm×4.6 mm, 5 μm) was used. The wavelength for measurement was at 371 nm and the temperature was at 30 ℃. Result The calibration curve was linear in the range of 5.98～47.84 g/mL for quercetin. The regression equation was A=7 750.68C+1 196.33 (r=0.999 7). Conclusion This method can be used to determine the content of quercetin in Luobuma Tea accurately.
Key words：Luobuma Tea;quercetin;HPLC;content determination
羅布麻茶為羅布麻Apocynum venetum L.的葉經(jīng)烘干粉碎制成的單方制劑,具有平肝安神、清熱利水作用。臨床用于肝陽眩暈、心悸失眠、浮腫尿少,高血壓病,神經(jīng)衰弱,腎炎浮腫。現(xiàn)已被《衛(wèi)生部藥品標準(中藥成方制劑)》收載,該標準含量測定項下規(guī)定以蘆丁為對照品,采用分光光度法測定。鑒于該含量測定方法操作比較繁瑣、重現(xiàn)性差,因此選擇蘆丁水解苷元槲皮素作為羅布麻茶含量測定的控制成分。本試驗報道高效液相色譜法測定羅布麻茶中槲皮素含量的方法學研究,結(jié)果表明,該方法簡便、準確、重現(xiàn)性好,可以控制羅布麻的質(zhì)量[1]。
1、儀器與試劑
島津LC-10ADvp高效液相色譜儀,SPD-10Avp紫外檢測器,HT-230A柱溫箱;Kromasil C18色譜柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);島津UV-2401紫外分光光度計;Sartorius BP211D電子天平(準確到0.01 mg)。槲皮素對照品(批號100081-200406,購自中國藥品生物制品檢定所)。甲醇為色譜純,水為重蒸水,其余試劑均為分析純。羅布麻茶樣品(山東省百草藥業(yè)有限公司提供)。
2、方法與結(jié)果
2.1 色譜條件
以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以甲醇-0.4%磷酸溶液(50∶50)為流動相;檢測波長為371 nm;柱溫30 ℃。理論塔板數(shù)按槲皮素峰計算應不低于4 000[2-3]。見圖1。
2.2 對照品溶液的制備
精密稱取槲皮素對照品6.15 mg,置于100 mL量瓶中,加流動相溶解并稀釋至刻度,搖勻,得對照品溶液(59.84 g/mL)。
2.3 供試品溶液的制備
取本品內(nèi)容物(過3號篩)約0.5 g,精密稱定,置圓底燒瓶中,加甲醇-25%鹽酸溶液(4∶1)20 mL,加熱回流1 h,取出,放冷,濾過,將濾液轉(zhuǎn)移至100 mL量瓶中,加甲醇-25%鹽酸溶液(4∶1)稀釋至刻度,搖勻,即得。
2.4 線性關(guān)系考察
分別精密吸取對照品溶液1、2、4、6、8 mL,置于10 mL量瓶中,加流動相稀釋至刻度,得對照品溶液1、2、3、4、5(濃度分別為5.98、11.97、23.94、35.90、47.84 g/mL)。每份溶液進2針,記錄峰面積,以峰面積為縱坐標,對照品濃度(g/mL)為橫坐標,計算回歸方程。得回歸方程：A=7 750.68C+1 196.33 (r=0.999 7),線性范圍為5.98～47.84 g/mL。
2.5 穩(wěn)定性試驗
取重復性試驗中批號06040101的供試品溶液為穩(wěn)定性試驗考察對象,分別在0、1、2、4、6 h進行,平均峰面積RSD=0.86%,結(jié)果表明供試品在8 h內(nèi)測定穩(wěn)定。
2.6 精密度試驗
取批號為06040101的供試品溶液6份,按上述色譜條件測定峰面積,連續(xù)測定6次。平均峰面積為305797,RSD=0.85%(n=6)。
2.7 加樣回收率試驗
取批號為06040101的樣品9份,每份0.25 g,精密稱定,置于圓底燒瓶中,分別加入對照品適量,按“供試品溶液的制備”方法配制9份供試品溶液,每份溶液進2針,采用標準對照法依法測定,計算,結(jié)果平均加樣回收率為98.25%,RSD=2.64%。表明本方法回收率良好(見表1)。表1 加樣回收率測定結(jié)果(略)表2 羅布麻茶樣品含量測定結(jié)果(略)
2.8 樣品測定結(jié)果
3、討論
槲皮素溶于甲醇、乙醇,微溶于水。本實驗考察了不同提取溶劑和水解條件,結(jié)果表明,選擇甲醇-25%鹽酸(4∶1)溶液為提取溶劑,直接回流水解60 min,對羅布麻茶中槲皮素提取效果好。對槲皮素甲醇溶液于200～400 nm波長下掃描,結(jié)果最大吸收波長為371 nm,因此,選用371 nm作為檢測波長,結(jié)果供試液中槲皮素與其它組分色譜峰得到較好的分離,靈敏度高和雜質(zhì)干擾小,且空白試驗無干擾,溶劑無干擾。本試驗所用方法和色譜條件可作為羅布麻茶質(zhì)量控制的含量測定方法。
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